Efficient Inactivation of Symbiotic Nitrogen Fixation Related Genes in Lotus japonicus Using CRISPR-下载文件详细资料
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  文件名称:  Efficient Inactivation of Symbiotic Nitrogen Fixation Related Genes in Lotus japonicus Using CRISPR-
  公司名称:  PhD Technology LLC
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     对生命现象中各种重要基因功能的研究,经常需要把这些基因在大肠杆菌、酵母等体系中表达并纯化蛋白。将所培养的大肠杆菌细胞(2升)离心并用小体积(~25毫升)溶液重悬。通过使用PhD高压均质机(D-3L),在15000Psi压力下经过一次破碎,即可达到超过95%以上的破碎率,并且通过外接的冷却循环系统可以保证菌液在低温下破碎,更好的保障了目标蛋白的结构及功能的完整性。

该实验结果对于我们顺利发表文章是非常重要的:(Wang et al., 2016. Efficient Inactivation of Symbiotic Nitrogen Fixation Related Genes in Lotus japonicus Using CRISPR-Cas9. Front. Plant Sci., http://dx.doi.org/10.3389/fpls.2016.01333)。

同时,在另外一个待发表的课题中,我们利用D-3L高压均质机,在低温下破碎莱茵衣藻(Chlamydomonas reinhardtii),也得到了很高的破碎效率(>95%)。与之相比,超声法破碎裂解衣藻细胞的效率比较低(经过多次破碎,还有约50%左右的细胞保持了结构的完整),而且耗时较长、且往往伴随局部过热现象。

       综合比较,研究人员发现,在实验中通过使用PhD高压均质机处理多种不同样品一般都可以较好的破碎效果。 

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